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核酸和蛋白質(zhì)是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構(gòu)成生命活動(dòng)的生長、繁殖、運(yùn)動(dòng)、遺傳和代謝等生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。研究蛋白質(zhì)和核酸間的相互作用是人們探索生命現(xiàn)象奧秘的關(guān)鍵，CHIP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用于蛋白與核酸互作關(guān)系的重要參考。

【應(yīng)用簡(jiǎn)介】

核酸和蛋白質(zhì)是組成生命的主要生物大分子，兩者的相互作用是構(gòu)成生命活動(dòng)的生長、繁殖、運(yùn)動(dòng)、遺傳和代謝等生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。研究蛋白質(zhì)和核酸間的相互作用是人們探索生命現(xiàn)象奧秘的關(guān)鍵，ChIP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)是應(yīng)用于蛋白與核酸互作關(guān)系的重要參考。

【實(shí)驗(yàn)原理】

CHIP實(shí)驗(yàn)在活細(xì)胞狀態(tài)下固定蛋白質(zhì)－DNA復(fù)合物，并將其隨機(jī)切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學(xué)方法沉淀此復(fù)合體，特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA片段，通過對(duì)目的片斷的純化與檢測(cè)，從而獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。

【實(shí)驗(yàn)方法】

Step1：細(xì)胞培養(yǎng)物交聯(lián)和樣品制備

Step2： 胞核制備和染色質(zhì)消化

Step3：染色質(zhì)消化和濃度分析

Step4：染色質(zhì)免疫沉淀法

Step5：將染色質(zhì)從抗體/Protein G Magnetic Beads上洗脫下來并解交聯(lián)

Step6：使用離心柱純化 DNA

Step7：用 PCR定量 DNA

【常見問題】

1、消化的染色質(zhì)濃度過低。

2、染色質(zhì)消化不足且片段過大（大于900 bp）。

3、樣品輸入對(duì)照組PCR反應(yīng)中無產(chǎn)物或產(chǎn)物很少。

4、陽性對(duì)照組蛋白H3-IP RPL30 PCR反應(yīng)中無產(chǎn)物。

5、陰性對(duì)照 Rabbit IgG-IP 和陽性對(duì)照 Histone H3-IP PCR 反應(yīng)中產(chǎn)物的數(shù)量相等。

【注意事項(xiàng)】

1、ChIP實(shí)驗(yàn)要求必須是新鮮的組織或活細(xì)胞，一次實(shí)驗(yàn)需至少需要150 mg新鮮的組織或2x10?個(gè)細(xì)胞，如不能提供新鮮的組織或活細(xì)胞，請(qǐng)聯(lián)系客服，獲得預(yù)處理方法；

2、部分抗體級(jí)別可能達(dá)不到ChIP級(jí)別的要求，需要采購對(duì)應(yīng)級(jí)別的抗體并通過陰陽性實(shí)驗(yàn)反饋結(jié)果可信性；

3、ChIP對(duì)照：現(xiàn)有陽性對(duì)照H3和陰性對(duì)照IgG；

4、采用CST品牌的SimpleChIP? Plus Enzymatic Chromatin IP Kit (Magnetic Beads)試劑盒用于本實(shí)驗(yàn)。