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酵母雙雜交系統(tǒng)是將待研究的兩種蛋白質(zhì)分別克?。ㄈ诤希┑浇湍副磉_質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子（如GAL4等）的DNA結合結構域（DNA-BD）和轉(zhuǎn)錄激活域（AD）上，構建成融合表達載體，從表達產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。

【技術原理】

隨著分子生物學研究尤其是人類基因組計劃的迅速發(fā)展，為適應對眾多基因或蛋白進行功能研究的發(fā)展趨勢，已出現(xiàn)了很多新技術。其中酵母雙雜交技術以其簡便，靈敏，高效以及能反映不同蛋白質(zhì)之間在活細胞內(nèi)的相互作用等特點在基因功能的研究中得到廣泛的應用。

酵母雙雜交系統(tǒng)的建立基于對真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認識。酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4含兩個結構域：DNA結合功能域和轉(zhuǎn)錄激活結構域，前者可識別DNA上的特異序列，并使轉(zhuǎn)錄激活結構域定位于所調(diào)節(jié)基因的上游，后者同轉(zhuǎn)錄復合體的其他成分作用，啟動相應基因的轉(zhuǎn)錄。將編碼DNA結合功能域的基因與已知誘餌蛋白質(zhì)基因構建在同一個表達載體上，在酵母中表達兩者的融合蛋白，將編碼DNA轉(zhuǎn)錄激活域的基因和cDNA文庫的基因構建在AD-LIBRARY表達載體上，同時將上述兩種載體轉(zhuǎn)化改造后的酵母。當兩種載體所表達的融合蛋白能夠相互作用時，功能重建的反式作用因子能夠激活酵母基因組中的報告基因，從而通過功能互補和顯色反應篩選到陽性菌落。將陽性反應的酵母菌株中的AD-LIBRARY載體提取分離出來，從而對載體中插入的文庫基因進行測序和分析工作。

【實驗流程】