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細胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡單，經(jīng)濟實惠的研究細胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗方法。其實驗原理是，當細胞長到融合成單層狀態(tài)時，在融合的單層細胞上人為一個空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細胞會逐漸進入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上，用微量頭或其他硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央的細胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至設定時間（采用無血清或低血清（<2%）排除細胞增殖的影響），取出培養(yǎng)板，觀察周邊細胞是否生長（修復）至中央劃痕區(qū)，以此判斷細胞的生長遷移能力。通常設定正常對照組與實驗組，實驗組中添加某些處理因素或藥物、外源性基因等，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)的修復能力，判斷比較各組細胞的遷移與修復能力。

條件好的實驗室可以使用活細胞成像來分析創(chuàng)傷愈合實驗中角質形成細胞或者成纖維細胞的遷移活動。結合包含的軟件分析算法，有可能延遲量化間隙表面關閉和關閉推移時間的速度。使用延時顯微鏡獲取數(shù)據(jù)的優(yōu)點是，可以在恒溫箱內(nèi)確定和穩(wěn)定的條件下記錄傷口分析。

通常，用于傷口愈合試驗的細胞類型旨在重建表皮的再生特征。永生化的細胞系和原代細胞經(jīng)常被用作這方面的模型。蕞常用的細胞類型是角質形成細胞和成纖維細胞。

細胞劃痕實驗步驟：

1、先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，均勻的劃橫線，大約每隔0.5~1cm一道，橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。

2、 在孔中加入約5×105個細胞，培養(yǎng)細胞至匯合度達到90%以上。

3、用頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕。

4、 PBS洗細胞3次，去除劃下的細胞，加入無血清培養(yǎng)基。

5、放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。按0，12，24，48h時間點取樣，100倍鏡下拍照。如果細胞遷移（修復）能力較強，需相應縮短觀察時間間隔。

6、結果分析：對不同時間點不同處理分組的劃痕間距進行分析。

細胞劃痕實驗注意事項：

1. 細胞的密度；劃痕實驗一般是幾種細胞的結合，但是每種細胞的生長速度會不一樣，所以需要按照細胞的生長特性調整培養(yǎng)時間，細胞鋪滿孔底時劃痕的效果會比較好，建議是100%的鋪滿。

2. 用槍頭畫線時盡量垂直，以6孔板為例 ，一個孔可以畫6條線

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細胞

4. 注意培養(yǎng)方式一定要改成無血清或者低血清的培養(yǎng)基，因為：劃痕后用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞，意在說明在監(jiān)測的 24 小時內(nèi)，劃痕的縮小是細胞 遷移作用的結果，所以要將細胞增殖造成細胞遷移的影響降到蕞低；但若細胞改成無血清培養(yǎng)后大面積漂浮，需要適量加入血清濃度不能高于2%。

5.放入37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱，培養(yǎng)。可按0，10，12，15時間點取樣，拍照(具體時間依實驗需要而定)。

6.統(tǒng)計方法：使用Image J軟件打開圖片后，抓取自己畫的線條，計算細胞間距離的平均值。