生物實驗小白必備:細(xì)胞劃痕實驗步驟詳解
除了transwell外,我們還可以用細(xì)胞劃痕實驗(cell ctratch test或wound healing assay)驗證細(xì)胞遷移能力。
1.培養(yǎng)板劃線標(biāo)記:通常隔0.5-1cm劃線,至少3條線;
2.細(xì)胞鋪板:每孔接種5x105個細(xì)胞,數(shù)量可根據(jù)狀態(tài)調(diào)整,但一定要鋪勻(十字法或8字法)
3.細(xì)胞劃線:200ul槍頭垂直橫線劃線,盡量保證力度一致;
4.去除劃下細(xì)胞:PBS洗滌2-3次,然后換無血清或低血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,根據(jù)實驗?zāi)康倪M(jìn)行藥物處理或其他;
5.觀察與計數(shù):放入37攝氏度5%CO2培養(yǎng)箱孵育,適當(dāng)時間取出進(jìn)行拍照。注意:若藥物處理后細(xì)胞形態(tài)變化,我們0h觀察點可先將6孔板放入培養(yǎng)箱幾分鐘后再拿出來觀察