是誰還分不清PCR、qPCR、RT-PCR、RT-qPCR!
PCR、qPCR、RT-PCR和RT-qPCR這四種技術(shù)都是基于聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)的技術(shù),但是它們之間存在一些區(qū)別。先來講講些四胞胎的概念:PCR:聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)是一種體外擴增DNA分子的技術(shù),利用DNA聚合酶和多個引物在所需溫度下擴增目標DNA分子。PCR反應(yīng)分為三個階段:預變性、變性-退火-延伸和延伸。PCR技術(shù)主要用于DNA序列的擴增和檢測,應(yīng)用廣泛,如基因克隆、DNA序列測定等。qPCR:實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)(qPCR)是一種實時檢測PCR過程中熒光信號變化的技術(shù),可以定量檢測目標分子的含量。qPCR通過在反應(yīng)體系中加入熒光探針或熒光染料,在PCR過程中實時監(jiān)測熒光信號的變化,從而計算出目標分子的拷貝數(shù)。qPCR技術(shù)主要用于DNA或cDNA的定量分析,如基因表達分析、病毒載量檢測等。RT-PCR:逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)是一種把RNA分子轉(zhuǎn)錄為cDNA后,在體外進行DNA擴增的技術(shù)。RT-PCR技術(shù)結(jié)合了反轉(zhuǎn)錄和PCR兩個步驟,主要用于RNA分子的擴增和檢測,如基因轉(zhuǎn)錄水平分析、miRNA表達研究等。RT-qPCR:逆轉(zhuǎn)錄實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-qPCR)是一種結(jié)合了逆轉(zhuǎn)錄PCR和實時定量PCR的技術(shù),可以對RNA分子進行定量分析。RT-qPCR先通過反轉(zhuǎn)錄酶將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后利用qPCR技術(shù)對cDNA進行定量分析。RT-qPCR技術(shù)廣泛應(yīng)用于RNA表達水平的研究,如基因表達分析、病毒載量檢測等。
總之,PCR、qPCR、RT-PCR和RT-qPCR這四種技術(shù)的主要區(qū)別在于它們的應(yīng)用領(lǐng)域和檢測目標不同。PCR主要用于DNA序列的擴增和檢測;qPCR可以實時定量檢測DNA或cDNA的含量;RT-PCR主要用于RNA分子的擴增和檢測;而RT-qPCR則結(jié)合了RT-PCR和qPCR的技術(shù),可以對RNA分子進行定量分析