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1. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇原則

在選擇用于血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物時(shí)，需確保體外培養(yǎng)細(xì)胞能在該動(dòng)物血清中良好生長且形態(tài)正常，對(duì)照組血清質(zhì)量需保持穩(wěn)定，且血清添加量高。為減小或避免動(dòng)物血清與人血清在理化及生物特性上的差異，應(yīng)優(yōu)先選擇與人類生物特性相近的動(dòng)物。離體器官、組織、細(xì)胞的供體動(dòng)物與含藥血清的供體動(dòng)物應(yīng)盡量保持一致來源，故大鼠與小鼠常被選用。

此外，有學(xué)者指出，臨床患者多處于某種病理狀態(tài)，而中藥在病理狀態(tài)動(dòng)物體內(nèi)的作用部位有效成分血藥濃度與正常狀態(tài)有所差異。通過對(duì)比正常與病理狀態(tài)下大鼠灌胃（ig）清肝化瘀方藥后的含藥血清對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC-7721的作用，發(fā)現(xiàn)前者僅輕微抑制，而后者則顯著抑制并能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡，提示病理狀態(tài)下大鼠血清中的有效成分及濃度可能發(fā)生變化，對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制作用更強(qiáng)。

然而，李丹等在研究心肌缺血模型大鼠與正常大鼠灌胃雙參寧心方后的血清對(duì)缺氧/復(fù)氧H9C2細(xì)胞的影響時(shí)，發(fā)現(xiàn)兩者含藥血清均能提高H9C2細(xì)胞活力，但正常大鼠含藥血清組的細(xì)胞總體活力更強(qiáng)。因此，選用健康動(dòng)物還是模型動(dòng)物仍需進(jìn)一步探討。

2. 給藥方案的選擇

（1）給藥劑量考量：

將含藥血清視為一種藥物時(shí)，其給藥劑量主要受兩方面因素影響：首先是動(dòng)物的給藥量，其次是培養(yǎng)體系或反應(yīng)體系中含藥血清的實(shí)際濃度。動(dòng)物給藥量的計(jì)算遵循以下公式：給藥劑量 = 人臨床用量 × 動(dòng)物等效劑量比值 × 培養(yǎng)液中血清稀釋度。在實(shí)際操作中，由于給藥濃度和體積的限制，給藥劑量需結(jié)合具體藥物的量效關(guān)系研究進(jìn)行靈活調(diào)整，不可盲目套用。

關(guān)于含藥血清濃度的確定，關(guān)鍵在于確保體外培養(yǎng)體系中藥物濃度與體內(nèi)血藥濃度相當(dāng)，同時(shí)不影響所培養(yǎng)組織、細(xì)胞的正常生長。為此，有學(xué)者創(chuàng)新性地將含藥血清制成凍干粉，通過以凍干粉形式加入反應(yīng)系統(tǒng)，能夠更精確地控制含藥血清的濃度，滿足實(shí)驗(yàn)需求。

(2) 給藥與采血時(shí)間安排：

鑒于中藥成分的復(fù)雜性及其各組分在理化性質(zhì)、體內(nèi)代謝過程上的差異，導(dǎo)致藥動(dòng)學(xué)參數(shù)多樣，難以制定統(tǒng)一的給藥頻次與采血時(shí)間標(biāo)準(zhǔn)。目前，存在幾種基于經(jīng)驗(yàn)的給藥方案：

(1）7～10日給藥法，即每日給藥1次，持續(xù)7～10日；

(2）三次給藥法，連續(xù)給藥三次，首次與第二次間隔20小時(shí)，第二次與第三次間隔4小時(shí)；3）兩次給藥法，首次給藥后2小時(shí)，以相同劑量再次給藥。

采血時(shí)間通常安排在最后一次給藥后的0.5～3小時(shí)內(nèi)，一般不超出6小時(shí)。采血過早，可能導(dǎo)致部分藥物成分尚未被吸收進(jìn)入血液；采血過晚，則部分藥物成分可能已在體內(nèi)發(fā)生轉(zhuǎn)化或被排泄，因此，理想的采血時(shí)機(jī)應(yīng)選擇在藥物達(dá)到穩(wěn)態(tài)血藥濃度的時(shí)間段內(nèi)。有研究者在對(duì)大量中藥藥動(dòng)學(xué)參數(shù)進(jìn)行深入分析后，提出了一個(gè)適用于中藥血清藥理研究的通用給藥方案：每日給藥2次，連續(xù)3日，于末次給藥后1小時(shí)采血。在進(jìn)行血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)前，可參考這些經(jīng)驗(yàn)給藥方案，并結(jié)合具體藥物的藥效動(dòng)力學(xué)研究結(jié)果，以確定最佳的給藥與采血時(shí)間。

(3）血清處理考量

血清內(nèi)含有酶、抗體、補(bǔ)體、細(xì)胞因子等多種生物活性物質(zhì)，這些成分可能對(duì)體外培養(yǎng)的組織、器官、細(xì)胞、病毒及病原菌等產(chǎn)生直接效應(yīng)，進(jìn)而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果，影響對(duì)藥物療效的客觀評(píng)估。為減少血清帶來的非藥理學(xué)干擾，并滿足細(xì)胞培養(yǎng)中減少微生物污染的要求，多數(shù)研究者選擇對(duì)含藥血清進(jìn)行滅活處理。常用的滅活方法是56℃水浴加熱30分鐘，此法能有效去除血清中的補(bǔ)體等干擾實(shí)驗(yàn)的活性成分。另有研究者采用乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑處理含藥血清，通過使蛋白質(zhì)變性來去除酶、激素等，旨在保留藥物的原有作用。

然而，有學(xué)者對(duì)比了無蛋白血清與正常血清與藥物的結(jié)合情況，發(fā)現(xiàn)無蛋白血清中游離藥物量較少，這表明處理后的血清可能與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)及臨床用藥的實(shí)際情況存在差異。含藥血清在處理上面臨兩難選擇：若不滅活，雖能最大程度保留各種活性物質(zhì)，但難以排除血清中原有生物活性物質(zhì)對(duì)中藥成分的潛在干擾；若進(jìn)行滅活，則可能同時(shí)去除藥物誘生的活性成分，導(dǎo)致血清藥效減弱。

因此，為平衡這一矛盾，可設(shè)置空白血清組作為對(duì)照，或根據(jù)實(shí)驗(yàn)所選指標(biāo)及藥物本身的性質(zhì)來綜合判斷含藥血清是否需要滅活處理。

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主營項(xiàng)目

1. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學(xué)檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動(dòng)生化檢測等

2. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

CCK8/MTT、原代細(xì)胞分離、流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學(xué)

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對(duì)定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實(shí)驗(yàn)

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實(shí)驗(yàn)

HE染色、免疫組學(xué)、電鏡

6. 生理生化實(shí)驗(yàn)

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標(biāo);動(dòng)植物營養(yǎng)指標(biāo)、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學(xué)實(shí)驗(yàn)

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實(shí)驗(yàn)

方案設(shè)計(jì)、整體實(shí)驗(yàn)交付、標(biāo)書寫作、論文潤色、協(xié)助投稿

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