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在生物醫(yī)藥領域，基因轉染是一種常見的實驗技術，用于將外源基因導入細胞中。然而，要想成功地進行穩(wěn)定轉染并篩選出陽性細胞株，選擇合適的篩選抗生素至關重要。本文將詳細介紹如何選擇穩(wěn)定轉染的篩選抗生素。

通常構建的載體上有兩個抗性基因，如，氨芐青霉素（Amp）和、新霉素抗性基因(neo)。

那么建立穩(wěn)轉細胞系時該用哪種抗生素來篩細胞呢？

很多真核表達質粒上都有兩個抗性基因，但一般其中只有一個抗性可以用來篩細胞。其中氨芐青霉素對細胞是沒有篩選作用的，這是用于構建克隆時篩選細菌的。所以這種情況下只能用G418。細胞轉染后用G418來加壓篩選，其原因是在載體上具有新霉素的抗性基因，當載體被轉染入細胞后，由于細胞擁有了抗新霉素的特性，因此在用新霉素加壓時，陽性細胞就不會被G418殺死。相反，未被轉染入載體的陰性細胞由于沒有對新霉素的抗性，那么當使用G418加壓時，當然就會被殺死。

如圖，這個載體就是兩個抗性，Amp和neo

但兩個抗性的本質區(qū)別在哪？

Amp是在bla啟動子驅動下表達，bla是原核表達啟動子。在大腸桿菌可以表達，因此，轉化后的質粒用Amp可以篩選到，而不用G418篩選。而neo是在SV40啟動子驅動下表達。SV40是真核表達啟動子，轉入真核細胞表達。所以只有轉入載體的細胞才能用G418篩選出來。

G418是一種氨基糖苷類似物，它通過干擾核糖體功能來阻止哺乳動物細胞蛋白質的合成。

因此在篩選過程中G418的濃度將對轉染細胞的篩選產生很大的影響。在篩選之前最好進行條件優(yōu)化確定最佳篩選濃度。盡管文獻有報道篩選濃度，最好還是要自己親自做一下篩選濃度的確定。一般來說，篩選濃度越高，篩選時間越長，陽性細胞的篩選率越高。但是，過高的篩選濃度或過長的篩選時間可能會對細胞造成毒性，導致細胞生長緩慢或死亡。因此，您需要根據您的實驗需求和細胞生長情況，選擇合適的篩選濃度和時間。另外，為了確保篩選的可靠性和重復性，建議在正式實驗前進行預實驗，以確定篩選的最佳條件。

還可以用其他的抗生素嗎？

用于陽性細胞篩選的還可能有潮霉素（標有Hyg),等等。根據載體中所含有的抗性基因進行選擇。

比如：1 pBlast 質粒 具有氨芐青霉素和Blast抗性，篩細菌時用氨芐青霉素，篩細胞時用Blast；2 pZeocin質粒 具有卡那霉素和Zeocin抗性，篩細菌時用卡那霉素，篩細胞時用Zeocin。

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