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在生物醫(yī)藥領(lǐng)域，基因轉(zhuǎn)染是一種常見的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，用于將外源基因?qū)爰?xì)胞中。然而，要想成功地進(jìn)行穩(wěn)定轉(zhuǎn)染并篩選出陽性細(xì)胞株，選擇合適的篩選抗生素至關(guān)重要。本文將詳細(xì)介紹如何選擇穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的篩選抗生素。

通常構(gòu)建的載體上有兩個(gè)抗性基因，如，氨芐青霉素（Amp）和、新霉素抗性基因(neo)。

那么建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系時(shí)該用哪種抗生素來篩細(xì)胞呢？

很多真核表達(dá)質(zhì)粒上都有兩個(gè)抗性基因，但一般其中只有一個(gè)抗性可以用來篩細(xì)胞。其中氨芐青霉素對細(xì)胞是沒有篩選作用的，這是用于構(gòu)建克隆時(shí)篩選細(xì)菌的。所以這種情況下只能用G418。細(xì)胞轉(zhuǎn)染后用G418來加壓篩選，其原因是在載體上具有新霉素的抗性基因，當(dāng)載體被轉(zhuǎn)染入細(xì)胞后，由于細(xì)胞擁有了抗新霉素的特性，因此在用新霉素加壓時(shí)，陽性細(xì)胞就不會被G418殺死。相反，未被轉(zhuǎn)染入載體的陰性細(xì)胞由于沒有對新霉素的抗性，那么當(dāng)使用G418加壓時(shí)，當(dāng)然就會被殺死。

如圖，這個(gè)載體就是兩個(gè)抗性，Amp和neo

但兩個(gè)抗性的本質(zhì)區(qū)別在哪？

Amp是在bla啟動子驅(qū)動下表達(dá)，bla是原核表達(dá)啟動子。在大腸桿菌可以表達(dá)，因此，轉(zhuǎn)化后的質(zhì)粒用Amp可以篩選到，而不用G418篩選。而neo是在SV40啟動子驅(qū)動下表達(dá)。SV40是真核表達(dá)啟動子，轉(zhuǎn)入真核細(xì)胞表達(dá)。所以只有轉(zhuǎn)入載體的細(xì)胞才能用G418篩選出來。

G418是一種氨基糖苷類似物，它通過干擾核糖體功能來阻止哺乳動物細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成。

因此在篩選過程中G418的濃度將對轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選產(chǎn)生很大的影響。在篩選之前最好進(jìn)行條件優(yōu)化確定最佳篩選濃度。盡管文獻(xiàn)有報(bào)道篩選濃度，最好還是要自己親自做一下篩選濃度的確定。一般來說，篩選濃度越高，篩選時(shí)間越長，陽性細(xì)胞的篩選率越高。但是，過高的篩選濃度或過長的篩選時(shí)間可能會對細(xì)胞造成毒性，導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢或死亡。因此，您需要根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需求和細(xì)胞生長情況，選擇合適的篩選濃度和時(shí)間。另外，為了確保篩選的可靠性和重復(fù)性，建議在正式實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定篩選的最佳條件。

還可以用其他的抗生素嗎？

用于陽性細(xì)胞篩選的還可能有潮霉素（標(biāo)有Hyg),等等。根據(jù)載體中所含有的抗性基因進(jìn)行選擇。

比如：1 pBlast 質(zhì)粒 具有氨芐青霉素和Blast抗性，篩細(xì)菌時(shí)用氨芐青霉素，篩細(xì)胞時(shí)用Blast；2 pZeocin質(zhì)粒 具有卡那霉素和Zeocin抗性，篩細(xì)菌時(shí)用卡那霉素，篩細(xì)胞時(shí)用Zeocin。

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