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裸鼠，也被稱為無胸腺裸鼠，是一種先天性胸腺缺陷的突變小鼠，其形成源于第VIII連鎖群內(nèi)裸體位點基因的純合。

裸鼠在科學研究中展現(xiàn)出巨大的潛力，這主要歸功于其nu基因獨特的遺傳特性。經(jīng)過全球?qū)嶒瀯游镞z傳育種學家的不懈努力，nu基因已被成功導入不同近交系動物中，從而創(chuàng)建了一系列動物模型。僅小鼠模型一種，就已建立了二十余種近交系裸鼠。

這些裸鼠具有不同的遺傳背景和nu基因的遺傳特性，為醫(yī)學生物學研究者提供了一種極其寶貴的試驗材料。本文將重點探討裸鼠的成瘤實驗方法。

常見的成瘤細胞

常見的易成瘤細胞：Hep-G2（肝癌）、Hep2（喉癌）、NCI-H460（大細胞肺癌）、A431（表皮癌）、SK-OV-3（卵巢癌）、MCF-7（乳腺癌）、SKBR3、A375/B16-F10（人黑色素瘤細胞）、SGC7901（人胃腫瘤細胞）以及KB（人口腔表皮樣癌細胞）。

成瘤速度較慢的細胞：CNE（鼻咽癌）、A549（肺癌）、SPC-A-1（肺腺癌）、HT-29（結(jié)腸癌）、BEL-7402（肝癌）、MDA-MB-231（乳腺癌）、CT26（小鼠結(jié)腸癌細胞）、SH-SY5Y（人神經(jīng)母細胞瘤細胞）、U251（人膠質(zhì)瘤細胞）、BGC-823（人胃癌細胞）以及PC-3（人前列腺癌細胞）。

一些具有爭議的細胞：Hela（宮頸癌）、HCT（人回盲腸癌細胞/人結(jié)直腸癌腺癌細胞）。其他常用的細胞還包括BMSC（骨髓間充質(zhì)干細胞）。

裸鼠成瘤小技巧

1、裸鼠的選擇：實驗室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。由于裸小鼠體內(nèi)正常T細胞可能隨年齡增長或受病毒感染等因素而增加，因此接種腫瘤實驗一般采用4-6周齡的裸鼠。

2、細胞狀態(tài)：細胞的狀態(tài)是成瘤實驗的關(guān)鍵。應取處于對數(shù)生長期的細胞，細胞密度達到80-90%為宜。在收集細胞前一天晚上更換新鮮培養(yǎng)基。

3、細胞處理：胰酶消化細胞后用預冷的PBS洗兩遍，以去除細胞中殘余的血清。然后用PBS或者無血清培養(yǎng)基吹打細胞沉淀至合適的濃度。一般皮下瘤接種的細胞量為1-5×10^6個細胞/支，接種體積為0.1-0.2ml。有條件的實驗室也可以加基質(zhì)膠以加速瘤塊的生成。

4、接種技巧：細胞消化后應盡快接種到裸鼠皮下，一般盡量在半小時內(nèi)完成。接種前用槍將細胞懸液充分的吹散，防止細胞成團。接種時，針頭在皮下進針深一點，約1cm深，針頭在皮下左右滑動幾次，以便細胞接種成團。

5、保定裸鼠技巧：左手拇指和食指捏緊裸鼠頸背部皮膚，小拇指夾住裸鼠尾巴。

6、腫瘤觀察與測量：接種后1-2周左右可以見到皮下開始出現(xiàn)腫塊。根據(jù)腫瘤細胞的特性和接種細胞的量，一般皮下成瘤的周期為1-2個月。腫瘤大小測量一般為1周兩次，使用游標卡尺測量腫瘤最長和最短部位，并計算體積。

裸鼠成瘤實驗疑難解答

問：為什么選擇裸鼠而不是普通老鼠或小白鼠？

答：裸鼠最大的特點是沒有胸腺等免疫器官，免疫力幾乎為零，對腫瘤細胞沒有免疫作用，因此易于成瘤。

問：瘤塊長起來又消失是怎么回事？

答：這可能是炎癥反應導致腫瘤細胞被小鼠自身吸收。建議繼續(xù)觀察腫瘤細胞吸收之后是否能在幾周內(nèi)重新長出。如果長不起來，建議更換裸鼠。

問：是否可以在一只小鼠上進行多個點接種？

答：不可以。因為多個腫瘤塊可能會相互影響。

問：腫瘤長不出來是怎么回事？

答：可能的原因包括腫瘤生長周期慢、細胞狀態(tài)差或不易成瘤、小鼠周齡太大或存在免疫排斥等。建議根據(jù)具體情況調(diào)整實驗條件或更換細胞系、小鼠品種。

問：腫瘤體積相差很大、大小不一是怎么回事？

答：這可能跟小鼠周齡及接種細胞量不一致導致。建議重新接種以確保實驗結(jié)果的一致性。

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