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蘇木精-伊紅染色法（HE染色法），作為石蠟切片技術(shù)中的經(jīng)典染色方法，廣泛應(yīng)用于組織學(xué)、胚胎學(xué)及病理學(xué)的教學(xué)與科研中。該方法利用堿性的蘇木精使細胞核及胞質(zhì)核酸呈現(xiàn)紫藍色，而酸性的伊紅則讓細胞質(zhì)與細胞外基質(zhì)染上紅色。

常見問題及解決方案

一、著色異常（過深或過淺）

著色不當(dāng)常因染色時間控制不當(dāng)所致。HE染色需借助鏡檢來精確控制時間，預(yù)實驗可幫助確定最佳染色時長。通常，新鮮蘇木素的染色時間約為1-3分鐘，分化時間亦需適中，過度分化后可通過水洗并復(fù)染蘇木素來調(diào)整。

二、切片清晰度問題（霧化、斑點）

烤片溫度或時間不足，導(dǎo)致脫蠟不徹底，切片上留有白色斑點。應(yīng)提高烤片溫度或延長烤片時間。

脫水步驟不當(dāng)，切片上殘留水分引起霧化。需優(yōu)化脫水流程，特別是在低濃度乙醇中停留時間應(yīng)較短，隨著乙醇濃度升高，脫水時間逐漸延長。

蓋玻片上封固劑殘留，影響切片清晰度。此時需重新封片以消除影響。

組織自溶、固定不及時或固定液濃度不足，以及固定前組織干枯，均可能導(dǎo)致染色后灰染現(xiàn)象，且難以補救。

固定劑不僅具有媒染作用，能與蛋白和染料結(jié)合增強著色，還能沉淀和凝固細胞內(nèi)成分，產(chǎn)生光學(xué)差異。因此，固定不良是切片染色模糊的主要原因。

淋巴結(jié)等細胞密集、結(jié)構(gòu)復(fù)雜的組織，在固定時易因固定液滲透不均而導(dǎo)致中央部分固定不佳，出現(xiàn)發(fā)灰現(xiàn)象?？刹捎脽o水乙醇與乙醚等量混合液處理切片5-10分鐘，隨后用乙醇和水洗滌，再用3%硫酸鐵銨溶液補充媒染5分鐘，以改善染色效果。

三、染色切片出現(xiàn)黑色雜質(zhì)與氣泡問題

雜質(zhì)主源為蘇木素染液中的金屬膜附著載玻片，建議每日染色前嚴格過濾蘇木素染液，或采用半氧化蘇木素以減少雜質(zhì)。

切片脫水環(huán)節(jié)若梯度乙醇處理不徹底，會導(dǎo)致封片后水分殘留及氣泡產(chǎn)生，需確保脫水完全。

四、細胞核呈現(xiàn)棕色問題

原因在于蘇木素染液過度氧化或返藍時間不足。染色前應(yīng)驗證蘇木素活性并適時更換，同時適當(dāng)增加返藍時間以糾正顏色。

五、切片染色不均的解決策略

組織固定不當(dāng)可致染色不均，如組織過大過厚致固定不充分，應(yīng)確保標本以4%中性甲醛充分固定，且固定液體積需為標本四倍，大標本需分割固定。

切片質(zhì)量影響染色均勻性，切片刀損傷會導(dǎo)致切片斷裂、不完整，傾角不當(dāng)則引起切片卷曲或皺褶，設(shè)備螺絲松動或操作手抖均可能造成切片厚薄不一或產(chǎn)生橫紋，需定期檢查切片器械并穩(wěn)定操作。

組織處理流程中的脫水、透明、浸蠟步驟需嚴格控制，乙醇濃度不足導(dǎo)致脫水不徹底，二甲苯浸泡過久使組織變脆，浸蠟溫度過高亦影響切片染色效果，均需按規(guī)范操作以避免染色不均。

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