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體外細胞實驗是我們開展課題研究及進行生物醫(yī)藥醫(yī)學研究非常重要的途徑。

今天整理了多種體外細胞實驗的干貨共大家學習和參考：MPC5足細胞缺氧模型、脊索樣細胞誘導(dǎo)分化成髓核樣細胞、人誘導(dǎo)多功能干細胞(hiPSC)誘導(dǎo)分化成脊索樣細胞、大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞成脂誘導(dǎo)模型、3T3-L1細胞成脂誘導(dǎo)模型、乳鼠二型肺泡上皮細胞(AECII)分離提取。

LPS誘導(dǎo)細胞炎癥模型

1. 實驗背景

脂多糖(Lipopolysaccharide)(英文簡寫LPS)是革蘭氏陰性細菌細胞壁外壁的組成成分，是由脂質(zhì)和多糖構(gòu)成的物質(zhì)(糖脂質(zhì))。脂多糖由三部分組成:類脂A、核心多糖、O-抗原。LPS中的類脂A部分作為脂質(zhì)雙分子層外層的組成部分進入到脂質(zhì)層中，糖鏈部分暴露在細胞外面，然后以這種形式存在于革蘭氏陰性細菌的細胞表面。在LPS的生理活性表現(xiàn)中被認為起到最重要作用的是類脂A部分，類脂A可以單獨體現(xiàn)其生理作用 。LPS很難從細胞壁脫落，當細菌死亡等時它會通過溶解、破壞細胞來脫落，并通過作用于動物細胞等而發(fā)揮其毒性。由于這種性質(zhì)，它不是細菌分泌到體外的毒素(外毒素)，而是不被分泌的"存在于細菌體內(nèi)的毒素"，所以又被稱為內(nèi)毒素。

內(nèi)毒素模型是將純化的LPS直接注射人動物體內(nèi)構(gòu)建的，由于其致病因素單一、能夠排除其他影響因素，而成為研究細菌感染單一成分在感染引起的炎癥反應(yīng)中的發(fā)病機制的理想模型1。LPS是革蘭氏陰性菌細胞壁最外層的一層較厚(8~10nm)的類脂多糖物質(zhì)，因其在免疫調(diào)節(jié)方面的特性而成為醫(yī)學研究的興趣點。

2. 實驗材料

① 實驗細胞：RWPE-1細胞。

② 器械：超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、生物倒置顯微鏡、臺式低速離心機

③ 試劑：0.25% 胰蛋白酶、雙抗、胎牛血清、PBS、RWPE-1細胞專用培養(yǎng)基、

3. 實驗操作

① 取LPS粉末溶于無菌水使其母液濃度為5mg/ml，0.22um過濾器過濾；

② 用細胞專用培養(yǎng)基稀釋LPS母液；

③ 細胞鋪板24h后，棄上清加入配制好的LPS溶液；

④ 37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)孵育24h；

⑤ 檢測相應(yīng)炎癥指標。

4. 評價方法

① ELISA檢測細胞炎癥因子表達(IL-1、IL-6、IL-18、TNF-α等)；

② 試劑盒檢測ROS、LDH、SOD、MDA等；

③ 流式/免疫熒光檢測ROS、JC-1等；

④ PCR/WB檢測炎癥因子基因和蛋白水平的表達等。

5. 經(jīng)驗總結(jié)

① LPS可溶于DMSO，也可溶于水，為了減少溶劑對細胞的影響，可選擇水去溶解LPS，最大溶解度為5mg/ml；

② LPS誘導(dǎo)細胞炎癥反應(yīng)，一定濃度誘導(dǎo)細胞不一定會出現(xiàn)細胞死亡的情況，因此不宜選用CCK8法去選擇LPS造模濃度，可選擇檢測多個炎癥因子去篩選濃度；

③ 不同廠家品牌的LPS貨號不同引起的炎癥反應(yīng)不一定相同，還需客戶自己選擇。

MPC5足細胞缺氧模型

1. 實驗背景

正常情況下，細胞體外培養(yǎng)需5%CO2與95%空氣環(huán)境，然而，降低培養(yǎng)環(huán)境的氧分壓或使細胞用氧障礙可以造成缺氧狀態(tài)，目前常用的缺氧方法有物理性缺氧法和化學性缺氧法。

① 物理性缺氧法：通過降低培養(yǎng)環(huán)境的氧分壓造成細胞缺氧性損傷，類似于體內(nèi)發(fā)生的低張性缺氧。

② 化學性缺氧法：在培養(yǎng)基中加入化學物質(zhì)，造成細胞用氧障礙或使培養(yǎng)基內(nèi)的氧氣耗盡，如在培養(yǎng)基內(nèi)加人氰化物、連二亞硫酸鈉等。化學缺氧模型制備簡單，但由于添加的物質(zhì)可能會改變培養(yǎng)基的化學成分，且添加劑本身對細胞有損傷作用，增加了實驗的混雜因素，需慎重選用。

③ 聯(lián)合缺氧法：2種或2種以上方法聯(lián)合使用可使細胞缺氧更為明顯。例如：在培養(yǎng)基中添加連二亞硫酸鈉，然后，將細胞放入95%N2+5%CO2密閉容器中，連二亞硫酸鈉已使培養(yǎng)基內(nèi)氧氣耗盡，再置入無氧外環(huán)境即可造成穩(wěn)定的細胞缺氧。

2. 實驗材料

① 實驗細胞：MPC5細胞       

② 器械：超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、生物倒置顯微鏡、臺式低速離心機、酶標儀、三氣培養(yǎng)箱

③ 試劑：0.25% 胰蛋白酶、雙抗、胎牛血清、PBS、DMEM培養(yǎng)基、CCK8

3. 實驗操作

① 細胞鋪兩塊96孔板，

② 37℃，5%CO2箱中孵育24h后，細胞換液；

③ 將其中一塊96孔板放置在設(shè)置缺氧的三氣培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

④ 培養(yǎng)至低氧細胞出現(xiàn)明顯損傷后分別取出96孔板；

⑤ 吸去培養(yǎng)基，向每孔中加入100μL CCK-8混合液；37℃，5%CO2箱中孵育1-2h；

⑥ 酶標儀測定在450 nm處的吸光度。

4.評價方法

① CCK8檢測；

② 顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。

5. 經(jīng)驗總結(jié)

① 細胞經(jīng)過常氧與低氧處理時，要控制好兩塊培養(yǎng)板內(nèi)的細胞密度，必須同時鋪板，保持細胞密度一致。

② 細胞鋪板后需要在常氧下穩(wěn)定培養(yǎng)24h，使其細胞能正常貼壁生長，24h后需同時更換新鮮培養(yǎng)基后在進行常氧與缺氧分別處理。

③ 低氧模型時間長短需要實時觀察細胞是否有損傷，不同的細胞缺氧模型的氧濃度和細胞損傷時間還需以具體實驗為準。

脊索樣細胞誘導(dǎo)分化成髓核樣細胞

1. 實驗背景

椎間盤再生研究中，脊索細胞獨特的生理功能受到關(guān)注。成人髓核內(nèi)脊索細凋亡與髓核內(nèi)蛋白多糖含量降低、膠原含量增加、水含量丟失相關(guān).脊索細胞分泌的可溶性因子具有引導(dǎo)終板軟骨細胞向髓核遷移，調(diào)節(jié)髓核細胞蛋白多糖合成的作用。脊索細胞可促進髓核軟骨樣細胞增殖和表型維持，在維持髓核內(nèi)細胞數(shù)量及細胞外基質(zhì)含量中起著重要作用。脊索細胞獨特的生理功能，在組織工程修復(fù)退變椎間盤研究中展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。

2. 實驗材料

① 實驗細胞：脊索樣細胞。     

② 器械：超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、生物倒置顯微鏡、臺式低速離心機。

③ 試劑：0.25% 胰蛋白酶、雙抗、hiPSC細胞專用培養(yǎng)基、ITS、NEAA、抗壞血酸、L-脯氨酸、地塞米松及TGF-β3。

3. 實驗操作

采用含有1%的ITS、1%的NEAA、1%的青鏈霉素、50ug/ml抗壞血酸、40ug/ml的L-脯氨酸、10nM的地塞米松及10ng/ml的TGF-β3的DMEM-HG培養(yǎng)基進行誘導(dǎo)，細胞誘導(dǎo)15天以上，實時觀察拍照。

4. 評價方法

① 可測定空泡細胞；

② 流式細胞熒光分選空泡細胞的GD2/TIE2的表型；

③ 免疫熒光染色分析各組細胞中GD2（雙唾液酸神經(jīng)節(jié)苷脂2）、TIE2（TEK受體酪氨酸激酶2）、II型膠原、aggrecan、T及NOTO的表達。

5. 經(jīng)驗總結(jié)

① 細胞誘導(dǎo)過程中需每天更換誘導(dǎo)培養(yǎng)基，已滿足細胞營養(yǎng)需求，若細胞出現(xiàn)較多死亡，及時更換成正常細胞完全培養(yǎng)基進行過度。

② 細胞誘導(dǎo)周期較長，容易出現(xiàn)細胞扎堆情況，拍照時盡量選擇細胞單層生長的區(qū)域去拍照。

③ 誘導(dǎo)后期鏡下觀察出現(xiàn)大量空泡細胞，即可收集樣本驗證誘導(dǎo)是否成功。

人誘導(dǎo)多功能干細胞(hiPSC)
誘導(dǎo)分化成脊索樣細胞

1.實驗背景

誘導(dǎo)性多能干細胞（Induced pluripotent stem cells，iPSCs）技術(shù)是指通過導(dǎo)入特定的轉(zhuǎn)錄因子將終末分化的體細胞重編程為多能性干細胞。分化的細胞在特定條件下被逆轉(zhuǎn)后，恢復(fù)到全能性狀態(tài)，或者形成胚胎干細胞系，或者進一步發(fā)育成新個體的過程即為細胞重編程（Cell reprogramming）。分化是基因選擇性表達的結(jié)果，并沒有改變遺傳物質(zhì)，而重編程在某種意義上就是分化的一個逆轉(zhuǎn)。

與經(jīng)典的胚胎干細胞技術(shù)和體細胞核移植技術(shù)不同，iPSCs技術(shù)不使用胚胎細胞或卵細胞，因此沒有倫理學問題。此外，利用iPSCs技術(shù)可以用病人自己的體細胞制備專有的干細胞，從而大大降低了免疫排斥反應(yīng)發(fā)生的可能性。iPSCs的岀現(xiàn)，在干細胞、表觀遺傳學以及生物醫(yī)學等研究領(lǐng)域都引起了強烈的反響，使人們對多能性的調(diào)控機制有了突破性的新認識，進一步拉近了干細胞和臨床疾病治療的距離。

iPSCs在細胞替代性治療以及發(fā)病機理的研究、新藥篩選以及神經(jīng)系統(tǒng)疾病、心血管疾病等臨床疾病治療等方面具有巨大的潛在價值。

2. 實驗材料

① 實驗細胞：hiPSC細胞。

② 器械：超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、生物倒置顯微鏡、臺式低速離心機。

③ 試劑：0.25% 胰蛋白酶、雙抗、hiPSC細胞專用培養(yǎng)基、ACTIVIN A、CHIR、NOGGIN、AGN193109、FGF2。

3. 實驗操作

① 取hiPSC細胞復(fù)蘇和擴培后測定細胞數(shù)量，

② 當細胞量密度大于5*105/cm2時，

③ 加入10ng/ml的ACTIVIN A，3uM的CHIR，50ng/ml的NOGGIN，10uM的AGN193109，及10ng/ml的FGF2處理細胞，

④ 培養(yǎng)到第5天左右，實時觀察細胞形態(tài)變化，

⑤ 收集爬片做免疫熒光驗證等。

4. 評價方法

可用IF或qPCR分析細胞NOTO、T及FOXA1、Chordin、FOXJ1、Noggin、及SHH的表達，來評價脊索樣細胞誘導(dǎo)分化成功。

5. 經(jīng)驗總結(jié)

① 培養(yǎng)前一天，提前包被人多潛能干細胞鋪底工作液的培養(yǎng)皿/瓶，并加入適量復(fù)蘇完全培養(yǎng)基，置于5% CO2的37℃恒溫細胞培養(yǎng)箱中。細胞復(fù)蘇需使用復(fù)蘇專用培養(yǎng)基，可大大提高細胞的復(fù)蘇效率。復(fù)蘇過程中，轉(zhuǎn)移細胞、吹打混勻和重懸細胞時，吹打力度要輕柔，并盡量減少吹打次數(shù)，細胞接種后，即刻在顯微鏡下觀察細胞團塊的大小，4 ~ 10個細胞的團塊為最佳。如果吹打力度過大或次數(shù)過多，導(dǎo)致細胞分散成單細胞，細胞復(fù)蘇率將偏低。

② 細胞培養(yǎng)需每天更換新鮮完全培養(yǎng)基，以滿足細胞營養(yǎng)需求，誘導(dǎo)過程中也需每天換液。

大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞成脂誘導(dǎo)模型

1. 實驗背景

間質(zhì)干細胞向成骨細胞的分化是理解骨形成機制的有力工具，它也被用于鑒別骨質(zhì)疏松癥、骨修復(fù)和成骨不全等遺傳紊亂疾病。同其他組織器官一樣，骨組織也在不斷地進行著細胞代謝，稱為骨代謝。它可以大致分為骨形成和骨重塑兩個階段，前者在個體生長發(fā)育期起主要作用，后者則持續(xù)整個生命周期。

成骨分化是骨生成的關(guān)鍵步驟，即骨髓間充質(zhì)干細胞經(jīng)歷骨原細胞（osteoprogenitor cells）、成骨前體細胞（pre-osteoblasts）、成熟的骨細胞（osteoblasts）和終末階段的骨細胞（osteocytes）的一個復(fù)雜的過程，其中涉及到多種類型細胞間和細胞內(nèi)的信號傳遞，如信號通路、轉(zhuǎn)錄因子、生長因子、MicroRNA 等，形成了一個完整的骨代謝調(diào)控負反饋環(huán)路。

2. 實驗材料

① 實驗細胞：大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞。

② 器械：超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、生物倒置顯微鏡、臺式低速離心機。

③ 試劑：0.25% 胰蛋白酶、100x雙抗、大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞專用培養(yǎng)基、成骨誘導(dǎo)分化試劑盒，茜素紅S染色液。

3. 實驗操作

① 當大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞的融合度達到80-90%時，即可用0.25%胰酶進行消化。

② 將消化下來的細胞，根據(jù)細胞即時的生長速度估算，接種一定量的細胞（接種后第二天的匯合度能達到70-80%）于6孔板中，每孔加入2ml專用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。

③ 將細胞置于37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

④ 當細胞融合度達到70-80%（或＞80%）時，小心將上清吸走，加入2ml大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。

⑤ 每隔三天換用新鮮的大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基。

⑥ 誘導(dǎo)2-4周后，視細胞的形態(tài)變化及生長狀況，使用茜素紅S染色液進行鑒定。

4. 評價方法

茜素紅S染色：茜素紅S是一種蒽醌類衍生物，能和多種金屬離子螯合生成穩(wěn)定的橙紅色或深紅色的復(fù)合物，是一種良好的金屬指示劑，也可作為吸光度法測定金屬離子的顯色劑，還可作為酸堿指示劑，或用于極譜法測定金屬離子。在組織學和組織病理學中，由于茜素紅S可與碳酸鈣或磷酸鈣中的鈣鹽螯合形成橙紅色復(fù)合物，而常用于染色或定位組織中的鈣質(zhì)沉積。   

5. 經(jīng)驗總結(jié)

① 大鼠脂肪間充質(zhì)干細胞成骨誘導(dǎo)時，融合度盡量達到80%，或者更高，誘導(dǎo)時可能會使細胞有所損傷導(dǎo)致后期產(chǎn)生骨細胞量少，但融合度一定不能低于70%。

② 換誘導(dǎo)培養(yǎng)基的頻率大致保持在3天一次，如果期間細胞產(chǎn)生的排泄物導(dǎo)致培養(yǎng)基內(nèi)雜質(zhì)多便可以馬上換液，不可以過度延長換液時間，導(dǎo)致細胞死亡。

③ 為了減少誘導(dǎo)過程中細胞飄起、不貼壁，鋪板前可先鋪明膠包被細胞板底部，換液時盡量輕輕加入誘導(dǎo)培養(yǎng)基，不要將細胞吹起，導(dǎo)致細胞脫落。

3T3-L1細胞成脂誘導(dǎo)模型

1. 實驗背景

細胞生物學方面，前脂肪細胞是一類同時具有增殖及分化為成熟脂肪細胞能力的前體細胞，此種前體細胞在不同的生長因子、激素等的作用下,經(jīng)歷有絲分裂克隆期、生長停滯期、進一步的克隆期 終末分化四個階段，細胞本身的成纖維狀態(tài)發(fā)生改變，通過胞質(zhì)內(nèi)甘油三酯聚集形成成熟脂肪細胞，這一過程，稱為“成脂分化”，該過程一直是肥胖研究領(lǐng)域的熱點。

為了能夠直觀地了解細胞分化內(nèi)部脂質(zhì)累積的過程，需要在體外建立數(shù)量可控，分化較為穩(wěn)定的成熟脂肪細胞分化模型。3T3-L1細胞 (小鼠胚胎成纖維細胞)是通過克隆分離得到的3T3(swiss小白鼠)的連續(xù)亞株。當3T3-L1細胞從快速分裂到長滿且接觸抑制時，3T3-L1細胞在適當?shù)恼T導(dǎo)下前脂肪可向脂肪樣逆轉(zhuǎn)。

2. 實驗材料

① 實驗細胞：3T3-L1細胞。

② 器械：超凈工作臺、CO2培養(yǎng)箱、生物倒置顯微鏡、臺式低速離心機。

③ 試劑：0.25% 胰蛋白酶、雙抗、3T3-L1細胞專用培養(yǎng)基、成脂誘導(dǎo)分化試劑盒。

3. 實驗操作

① 加1ml 0.1%明膠到六孔板中，搖勻，使其能覆蓋各孔底面。

② 將鋪有0.1%明膠的六孔板放置在超凈臺或CO2培養(yǎng)箱至少30min。

③ 30min后吸去明膠即可用于接種細胞；

④ 將細胞接種于六孔板，37℃、5%CO2培養(yǎng)。

⑤ 當細胞匯合度達到100%時，小心地將孔內(nèi)完全培養(yǎng)基吸走，向六孔板中加入2ml OriCell?小鼠細胞成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基A液。

⑥ 誘導(dǎo)3天后，吸去A液，加入成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基B液。

⑦ 維持1天后，換回A液進行誘導(dǎo)。

⑧ A液和B液交替使用。

⑨ 重復(fù)誘導(dǎo)和維持過程，直到出現(xiàn)足量、大小適宜的脂滴，即可油紅O染色。

4. 評價方法

油紅O脂肪染色法是指在日常病理診斷和科研工作中為了顯示組織或細胞內(nèi)的脂肪常采用油紅O進行染色的方法，油紅O為脂溶性染料，在脂肪內(nèi)能高度溶解，可特異性的使組織或細胞內(nèi)甘油三酯等中性脂肪著色?？蓪⒂椭境杉t色，顯微鏡下觀察染色情況即可評估細胞的成脂性。   

5. 經(jīng)驗總結(jié)

① 油紅O染色后盡快拍照，或者用封口膜封裝后置于4℃，不要超過一周，油脂會相互融合，無法保持染色時的狀態(tài)。

② A液刺激脂滴形成，B液維持已形成的脂滴，并促進脂滴增大。通常情況下按照“A液3天，B液1天”的使用方法，也可根據(jù)細胞狀態(tài)靈活調(diào)整A液、B液的使用比例。

③ 為了減少誘導(dǎo)過程中細胞飄起、不貼壁，鋪板前先鋪明膠包被細胞板底部，誘導(dǎo)時間過長也有可能出現(xiàn)細胞層卷邊情況，若已有足量、大小合適的脂滴，即可染色收集。

乳鼠二型肺泡上皮細胞(AECII)分離提取

1. 細胞簡介

二型肺泡細胞(ATⅡ)又稱顆粒肺泡細胞，散在分布于ATⅠ肺泡細胞(ATⅠ)之間及其相鄰的肺泡間隔結(jié)合處。其體積較小，呈立方形，表面稍突向肺泡腔。細胞核大而圓，胞質(zhì)染色較淺淡，胞質(zhì)中常見空泡。數(shù)量較ATⅠ多，ATⅡ占肺泡上皮細胞總數(shù)的14%到16%，但僅覆蓋5℅的肺泡表面。二型肺泡細胞能分泌顆粒內(nèi)容，在肺泡上皮表面形成表面活性物質(zhì)，具有降低肺泡表面張力，穩(wěn)定肺泡大小的重要作用。

2. 原代分離提取步驟

① 將乳鼠移入超凈臺，從胸部橫斷乳鼠，小心取出雙肺置于預(yù)冷的PBS液中，盡可能除凈殘留的氣管組織和結(jié)締組織等非肺組織，PBS液清洗2~3次，用鋒利眼科剪將肺組織剪為1mm3 左右大小的組織碎塊，用0.25%胰酶（含0.01% DnaseⅠ）溶液清洗1次，然后繼續(xù)用0.25%胰酶（含0.01% DnaseⅠ）溶液于37℃攪動消化10~20min。

② 用等量10%FBS的DMEM/F12（完全培養(yǎng)基）終止消化，200目篩網(wǎng)過濾后，1500r/min低溫離心５min，去上清，收集沉淀，0.1%Ⅰ型膠原酶 37℃，5% CO2 孵箱內(nèi)消化10~20min。
終止消化仍用等量含10%FBS的DMEM/F12，1000r/min離心5min，收集細胞沉淀。

③ 將細胞懸液接種入培養(yǎng)瓶中，置37℃，5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)孵育45min，此時貼壁的細胞多為成纖維細胞，懸在培養(yǎng)液中的細胞多數(shù)為AECⅡ、部分成纖維細胞及其他雜細胞。

④ 將培養(yǎng)液吸出接種于另一培養(yǎng)瓶中，同樣繼續(xù)37℃孵育40min，連續(xù)2~3次，最后吸出培養(yǎng)液，800r/min離 心5min，去上清，用含10%胎牛血清的DMEM/F12重懸細胞沉淀，按密度為4*105個細胞／cm2 接種于培養(yǎng)瓶中，37℃，5% CO2條件下培養(yǎng)24h后換液，去除未貼壁細胞繼續(xù)培養(yǎng)3~6d，倒置顯微鏡觀察細胞生長狀態(tài)和形態(tài)特征。培養(yǎng)48h細胞狀態(tài)良好，可進行進一步的后續(xù)實驗。

3. 乳鼠二型肺泡上皮細胞（AECⅡ）質(zhì)量評價

① 臺盼藍染色法

活細胞計數(shù)：臺盼藍染色后顯微鏡下進行細胞計數(shù)，計算細胞存活率（活細胞數(shù)/細胞總數(shù)×100%）。

② AECⅡ形態(tài)特征觀察

體外原代培養(yǎng)的AECⅡ約18h已經(jīng)貼壁生長。

培養(yǎng)24h，細胞伸展呈多邊形或立方形，聚集成島狀生長，細胞之間連接緊密，細胞胞質(zhì)豐富，內(nèi)含大量反差明顯的細小顆粒（圖1）。

培養(yǎng)36~48h，細胞平展呈多邊形，逐漸融合，相互連接成細胞單層。培養(yǎng)大約72h后，細胞逐漸變得扁平，細胞內(nèi)顆粒較前減少，有排空現(xiàn)象，胞質(zhì)顏色變淡（圖2）。

③ 透射電鏡觀察

細胞消化后，離心，收集細胞沉淀。經(jīng)戊二醛固定處理程序后，制成電鏡細胞標本，用電鏡觀察細胞特征性的超微結(jié)構(gòu)，可見黑色顆粒狀特征性的板層體，細胞膜上有明顯的微絨毛。

④ 純度鑒定

經(jīng)SP-C免疫熒光鑒定細胞純度。

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1. 動物實驗

動物飼養(yǎng)、疾病造模、行為學檢測、心功能、無創(chuàng)血壓、血常規(guī)、全自動生化檢測等

2. 細胞實驗

CCK8/MTT、原代細胞分離、流式細胞實驗、細胞劃痕、侵襲、遷移、EDU染色、轉(zhuǎn)染、穩(wěn)定株

3. 分子生物學

PCR檢測、熒光定量PCR、絕對定量PCR、端粒酶長度、pull down、雙熒光素酶、SSR、SNP檢測等

4. 蛋白實驗

WB、Co-IP、酵母雙雜

5. 病理實驗

HE染色、免疫組學、電鏡

6. 生理生化實驗

肝腎功能、抗氧化、免疫反應(yīng)等生理免疫指標;動植物營養(yǎng)指標、微量元素、重金屬、酶活等。

7. 多組學實驗

基因組、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、蛋白組、代謝組、微生物多樣性、宏基因組、生信分析

8. 整體課題實驗

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