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轉(zhuǎn)錄調(diào)控項(xiàng)目信息總結(jié)

一、常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)問(wèn)題1. 野外取樣野外取樣無(wú)液氮、干冰等速凍如何保存？去除葉片表面的脂化膜，剪碎葉片，存于RNA later保存液中，提取時(shí)5倍體積提取。1-2天問(wèn)題不大。2. 血液及腫瘤樣本需要做哪些特殊處理血液和腫瘤樣本由于RNA酶含量豐富，極易造成RNA的降解，因此在活體取樣后，需要盡快放入液氮速凍或加入RNAlater防止RNA降解。2. 做轉(zhuǎn)錄組項(xiàng)目時(shí)RNA中很多DNA污染，可以建庫(kù)嗎？可以，磁珠調(diào)取的方法，不會(huì)有影響。但是蛋白污染的話會(huì)有影響，有些蛋白的存在會(huì)在后續(xù)建庫(kù)造成干擾。3. …

細(xì)菌鑒定中常用的生理生化試驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)了解細(xì)菌生理生化反應(yīng)原理，掌握常用的細(xì)菌鑒定生理生化反應(yīng)試驗(yàn)方法。(2)了解細(xì)菌碳、氮代謝類型的多樣性及細(xì)菌在不同培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物在鑒別細(xì)菌中的意義。(3)了解細(xì)菌糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、IMViC實(shí)驗(yàn)的原理及在腸道菌鑒定中的重要作用。二、實(shí)驗(yàn)原理微生物個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，但種類繁多，在食品、醫(yī)藥、工農(nóng)業(yè)、環(huán)保等人類生產(chǎn)生活的領(lǐng)域均有廣泛涉及，涵蓋了有益與有害的眾多種類。分類是認(rèn)識(shí)、研究客觀事物的一種基本方法，我們要認(rèn)識(shí)、研究和利用種群龐大的微生物資源…

超詳細(xì)！HE染色介紹

蘇木精-伊紅染色法，簡(jiǎn)稱HE染色法，石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。蘇木精染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)與胞質(zhì)內(nèi)的核酸著紫藍(lán)色;伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。1、嗜酸型&嗜堿性易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性和嗜酸性;而對(duì)堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性。1)嗜堿性嗜堿性是指組織和細(xì)胞內(nèi)酸性物質(zhì)成分對(duì)堿性染料(含有陽(yáng)離子著色基團(tuán)的染料，如蘇木精、結(jié)晶紫、美藍(lán)等)具有親和性。2、蘇木精&伊紅1)蘇木精由蘇…

關(guān)于WB，你不得不注意的小細(xì)節(jié)

在蛋白印跡(Western blot，WB)實(shí)驗(yàn)中，確實(shí)需要注意一些操作要點(diǎn)以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。以下是一些主要的注意點(diǎn)： 一、樣品制備 1.樣品量要恰當(dāng)：過(guò)多或過(guò)少的樣品均可能影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。 2.蛋白酶抑制劑的使用：在制備樣品過(guò)程中應(yīng)加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白被降解。 3.提取、濃縮并保存樣品：不立即用于實(shí)驗(yàn)的樣品應(yīng)適當(dāng)提取、濃縮并保存在恰當(dāng)?shù)臈l件下以保持蛋白穩(wěn)定不受損。 二、凝膠電泳 1.制備適當(dāng)濃度的分子篩選凝膠：不同的蛋白分子量需要使用不同濃度的凝膠…

什么是PCR，病毒是如何被檢測(cè)出來(lái)的？

聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction，PCR）是80年代中期發(fā)展起來(lái)的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它能在一個(gè)試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時(shí)內(nèi)擴(kuò)增至十萬(wàn)乃至百萬(wàn)倍,使肉眼能直接觀察和判斷；可從一根毛發(fā)、一滴血、甚至一個(gè)細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研究和檢測(cè)鑒定。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項(xiàng)革命性創(chuàng)舉和里程碑。PCR實(shí)驗(yàn)室其實(shí)功能極其強(qiáng)大，定性分析和定量檢測(cè)是它最大的兩個(gè)應(yīng)用方向，那除了新冠核酸檢測(cè)，我們“萬(wàn)能”的PCR實(shí)驗(yàn)室還能做些什么呢？接下來(lái)就給…

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)

細(xì)胞劃痕（Wound Healing)是一種操作簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的研究細(xì)胞遷移/腫瘤侵襲的體外試驗(yàn)方法。其實(shí)驗(yàn)原理是，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層細(xì)胞上人為一個(gè)空白區(qū)域，稱為“劃痕”。劃痕邊緣的細(xì)胞會(huì)逐漸進(jìn)入空白區(qū)域使“劃痕”愈合。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量頭或其他硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至設(shè)定時(shí)間（采用無(wú)血清或低血清（<2%）排除細(xì)胞增殖的影響），取出培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長(zhǎng)（修復(fù)）至中央…

【科普小知識(shí)】動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用范圍一般都有哪些？

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)在科學(xué)研究和醫(yī)學(xué)發(fā)展中起到了至關(guān)重要的作用。通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，科學(xué)家們可以對(duì)人類生理和病理機(jī)制進(jìn)行深入探索，對(duì)藥物和治療方法進(jìn)行評(píng)估和篩選，以及對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行安全性和有效性測(cè)試。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一、疾病機(jī)制研究動(dòng)物模型是研究人類疾病機(jī)制的重要工具。通過(guò)建立與人類相似的疾病模型，科學(xué)家們可以在動(dòng)物身上模擬疾病的發(fā)病過(guò)程，深入了解疾病的病因、病理生理機(jī)制以及疾病的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。這有助于發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)，為新藥研發(fā)提供理論支持。二、藥物研發(fā)與篩選藥物研發(fā)過(guò)程中，…

實(shí)驗(yàn)解析｜流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題分析

流式細(xì)胞技術(shù)（Flow Cytometry，簡(jiǎn)稱FCM）是一種高效的方法，用于分析和收集細(xì)胞懸液中的單個(gè)細(xì)胞。FCM的優(yōu)勢(shì)在于其速度快、結(jié)果客觀，并且具有重要的統(tǒng)計(jì)意義。它能夠處理復(fù)雜的樣本，同時(shí)收集多個(gè)參數(shù)，其可靠性和重復(fù)性都非常出色。今天我將總結(jié)并分享一系列關(guān)于流式細(xì)胞技術(shù)的常見(jiàn)問(wèn)題及其分析。對(duì)于流式細(xì)胞術(shù)的原理和步驟不甚清晰的同學(xué)，建議先閱讀本公眾號(hào)以往的文章，了解背景知識(shí)。1.熒光抗體染色無(wú)信號(hào)或信號(hào)弱（1）加入的抗體量不足：這是最簡(jiǎn)單的一種情況，只需要摸索實(shí)驗(yàn)…

【實(shí)驗(yàn)技術(shù)】一文了解分子生物學(xué)經(jīng)典實(shí)驗(yàn) western blot

一、基本原理Western Blot 即蛋白免疫印跡，是等量上樣的蛋白樣品通過(guò)電泳按分子量分離蛋白質(zhì)、再轉(zhuǎn)移到合適的膜上，然后通過(guò)特異性抗體對(duì)膜上的目的蛋白或特定位點(diǎn)修飾進(jìn)行結(jié)合和識(shí)別，經(jīng)過(guò)抗體偶聯(lián)的顯色或顯影系統(tǒng)獲得條帶結(jié)果，通過(guò)分析條帶位置和深度來(lái)分析目的蛋白或特定位點(diǎn)修飾的水平。二、步驟（一）由蛋白樣品制備；制膠、上樣、電泳；轉(zhuǎn)膜；封閉、抗體孵育；曝光五個(gè)步驟組成，其簡(jiǎn)要流程如下：詳細(xì)實(shí)驗(yàn)步驟：1.蛋白樣品制備1.1蛋白樣品制備選擇合適的裂解液根據(jù)蛋白性質(zhì)不…